供体与受体的选择( l )供体选择①
具备遗传优势,在育种上有价值大的母牛作为供体。②
具有良好的繁殖能力,无遗传缺陷,分娩顺利无难产。③
健康无病,体质差的母牛通常对超数排卵处理反应差。④
营养良好,供体日粮应全价,并注意补给青绿饲料,膘情适度,不要过肥或过瘦。(
2
)受体的选择受体母牛可选用非优良品种的个体,但应具有良好的繁殖性能和健康体况,可选择与供体发情同期的母体为受体,一般两者的发情同步差不宜超过士24
小时。2
.发情同期化在胚胎移植过程中,必须要求受体和供体达到同期发情。这样,两母牛的生殖器官就能处于相同的生理状态,移植的胚胎才能正常发育。受体母体的同期发情处理,往往与供体母牛的超数排卵同时进行。在大的牛群中,可以选出相当数量的和供体同时自然发情的受体来。但在小范围并在限定的时间内进行胚胎移植,必须首先要求受体与供体同期发情和排卵。实践证明,受体和供体发情开始的时间越接近,移植的受胎率就越高;相差的时间越长,则受胎率越低。因为妊娠初期的子宫环境在不断地发生变化。一定时期的子宫环境只适合于相应发育阶段的胚胎。当前比较理想的同期发情药物是pgs
及其类似物,其用量根据药物的种类和用法而不同。采用子宫灌注的剂量要低于肌肉注射的剂量。在注射pgfz
。后24 小时,配合注射促进卵泡发育的pmsg 或fsh
,可以明显提高同期发情效果。3 .超数排卵的处理( l )用fsh
超排在发情周期的9 一13 天中的任何一天开始肌注fsh 。以递减剂量连续肌注4
天,每天注射2 次,剂量按牛的体重、胎次作适当调整,总剂量为300 一400
大鼠单位。在第一次注射fsh 后48 小时及60 小时时,各肌肉注射一次pgfz
。每次2 – 4 毫克,若采用子宫灌注剂量可减半。进口pgfz
。及其类似物,由于产地、厂家不同所用剂量不一样。( 2 )用pmsg
超排在发情周期的第11- 13 天中任意一天肌肉注射一次即可,按每千克体重5
国际单位确定pmsg 总剂量,在注射pmsg 后48 小时及60
小时时,分别肌肉注射pgfz 。一次,剂量同。母牛出现发情后12
小时,再肌肉注射抗pmsg , 剂量以能中和pmsg 的活性为准。4
.供体的发情鉴定与配种超数排卵处理结束后,要密切观察供体的发情征状,正常情况下,供体大多在超排处理结束后12-
48
小时发情。牛发情鉴定主要以接受它牛爬跨且站立不动的时间,把此时作为零时,由于超排处理后排卵数较正常发情牛多且排卵时间不一致,如精子和卵子的运行受超排处理的影响,为了确保卵子受精,采取增加输精次数和加大输精量的方法,新鲜精液优于冷冻精液。一般在发情后8
-12 小时输第一次精,以后间隔8 一12 小时再输精2 次。

一、同期发情技术

同期发情又叫做同步发情或发情控制技术。它是利用某些激素人为地控制并调整若干母牛在一定时间内集中发情,它可以对受控制的母牛不经过发情检查即在预定时间内同时受精。

现行的同期发情技术有两途径,都是通过控制黄体——延长或缩短其寿命,降低孕酮水平,使母牛摆脱孕激素控制的时间一致,从而导致卵泡同时发育,达到同期发情的目的。

同期发情的处理方法主要有:

1.孕激素处理:孕激素处理是人为地造成黄体期,控制发情。母牛处理一定时间后,同时停药即可引起母牛发情,此类孕激素包括孕酮及其合成类似物,如甲孕酮、炔诺酮、氯地孕酮、18—甲基炔诺酮等。投药方式有阴道栓塞,皮下埋植等。

2.前列腺素及其类似物处理,前列腺素处理是溶解卵巢上的黄体,中断周期黄体发育,使牛同期发情。

由于前列腺素如氯前列烯醇等仅对卵巢上有功能性黄体的母牛起作用,而对群体来说,黄体存在于发情周期的各个阶段,所以必须间隔11天后再用药1次,才能使群体达到同期化。前列腺素的投药方式有肌注、宫腔或宫颈注入。

二、胚胎移植技术

胚胎移植是对经超数排卵处理的供体母牛,用手术或非手术手段从其输卵管或子宫内取出若干早期胚胎,移植到经过同期发情处理的另外一群受体母牛的相同部位,以达到产生供体牛后代的目的。

1980年英国剑桥大学的科学家WaterHeap从安哥拉母兔上取出4细胞期的2枚胚胎移植到比利时兔的输卵管内获得成功。1951年胚胎移植在牛上获得成功。我国胚胎移植技术起步较晚,最早开始于1973年,1978年在牛上胚胎移植获得成功。目前国外鲜胚移植妊娠率可达60%以上,我国鲜胚移植受胎率可达50%~60%,冻胚为40%~45%。

超数排卵

超数排卵简称超排,指在母牛发情周期的适宜时间,用促性腺激素处理母牛,使卵巢比在自然情况下有较多的卵泡发育并排出多个有受精能力的卵子。超排技术的应用,可充分发挥优良种母牛的作用,加速牛群改良,同时也是胚胎移植的重要环节。

1.常用的超排处理方法:

PMSG+PGF2α法在性周期第8~12天内1次肌注PMSG2000~3000IU,48小时后肌注PGF2α15~25毫克或子宫灌注2~3毫克,以后的2~4天内,多数母牛发情,但PMSG不宜PGF2α同时注射,否则会导致排卵率降低。

FSH+PGF2α法在性周期第8~12天内1次肌注FSH每日2次,连注3~4天,总剂量30~40毫克,在第五次注射的同时,注射PGF2α15~25毫克。在有必要的情况下,可在牛发情后肌注GnRH200~300微克。

促排卵类药物经超排处理的供体,卵巢上发育的卵泡数要多于自然发情的卵子数,仅依靠内源性促排卵激素不能达到超排目的。因此,在供体母畜出现发情时,需要静脉注射外源性hCG或GnRH、LH等,以增强排卵效果,减少卵巢上残余的卵泡数。

孕激素如用孕激素作超排预处理,可以提高母牛对促性腺激素的敏感性。

超排处理的时期应选择在发情周期的后期,即黄体消退时期,此时卵巢正处于由黄体期向卵泡期过渡。

2.提高反复进行超排处理的措施

超排应用的PMSG、HCG、FSH及LH均为大分子蛋白质制剂,对母牛作反复多次注射后体内会产生相应的抗体,使卵巢的反应逐渐减退,超排效果也随之降低。

增加药物的剂量在第二次超排处理时,可将促性腺激素的剂量加大,以到达正常的超排处理。

间隔一定时间处理母牛每进行一次超排处理,使卵巢经历一次沉重的生理负担,需经一定时期才能恢复正常的生理机能。所以,在给供体体母牛作第二次处理的间隔时期应为60~80天,第三次处理时间则需长到100天,在每一次冲取胚胎结束后,应向子宫内灌注PGF2α以加速卵巢的恢复。

更换激素制剂当连续两次使用同一种药物进行处理时,为了保持卵巢对激素的敏感性,可以更换另一种激素进行超排处理,以获得较好效果。

胚胎移植

1.胚胎移植的意义

通过胚胎移植可以充分发挥优良母畜的繁殖潜力,使优良供体免去很长的怀孕期,缩短繁殖周期,生产更多的优秀后代个体。2)利用超数排卵,一次可获得更多的优良胚胎缩短世代间隔,及早进行后裔测定。

提高生产效率,诱发肉牛怀双胎,即向已配种的母畜移植一个胚胎,或者向未配种的母畜移植两个胚胎。

有利于防治疾病,减少由于本交引起的生殖疾病。

胚胎的冷冻保存可以使胚胎移植跨地域和时空,大大节约购买和运输活畜的费用,还可以从养母得到免疫能力,更容易适应本地区的生态环境。

胚胎的冷冻保存,可以避免因遭受意外灾害而灭绝,且费用远远低于活畜保存,并且它与冷冻精液可共同构成动物优良性状的基因库。

胚胎移植是研究受精作用,胚胎学和遗传学等理论问题的一种良好手段。

2.胚胎移植的生理学基础和基本原则

生理学基础

①母牛发情后生殖器官的发育母牛的发情,配种都是受精妊娠的前奏,而发情配种的结局自然地就是受精和妊娠。大多数发情的母牛,发情后不论是否配种,或配种后是否受精,在最初一段时期,生殖系统均处于受精后的生理状态下,此时高水平孕酮使子宫内膜的组织增生和分泌机能增加及生理生化发生特异性变化,在生理机能上妊娠与未孕并无区别。这就给胚胎成功的移植和在受体内正常发育提供了理论依据。

②早期胚胎的游离状态早期胚胎发育和子宫没有建立实质性联系,这使其可以脱离活体而被取出成为可能。

③胚胎移植不存在免疫问题受体母畜的生殖道对于具有外来抗原物质的胎盘和胎膜组织,在同一物种之内,无排斥现象。

④胚胎和受体之间建立有效联系,保证胎儿以后的正常发育。

⑤胚胎的遗传特性不受受体的影响。

胚胎移植的基本原则

①胚胎移植前后所处环境的同一性

a.供体和受体在分类学上的相同属性,即两者须属于同一物种。

b.动物生理上的一致性。即受体和供体在发情时间上的同期性,一般要求相差24小时以内。

c.动物解剖部位的一致性。即移植后的胚胎与移植前所处的空间环境相似性。

②胚胎发育的期限胚胎采集和移植的期限不能超过周期黄体的寿命,最快要在周期黄体退化之前数日进行移植。通常在供体发情配种后3~8天收集胚胎,受体同时接受移植。

③胚胎的质量胚胎不应受到任何不良因素的影响而危及生命力,必须经过鉴定确认为正常者。

④供受体的状况供体的生产性能,经济价值均须大于受体,两者均须健康无病。此外,还需强调的是胚胎移植只是空间位置的变换,而不是生理环境的改变。

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